流产衣原体CPAF基因的克隆序列分析及原核表达

来源：华北农学报杂志2018年第3期北京时间：

作者：刘萍, 马晓霞, 周小凯, 马鹏, 常秋燕, 李林杰, 李凌浩, 马忠仁

单位：1. 西北民族大学 生物工程与技术国家民委重点实验室, 甘肃 兰州 730030;；2. 甘肃省动物细胞工程技术研究中心, 甘肃 兰州 730030;；3. 西北民族大学 生命科学与工程学院, 甘肃 兰州 730030

摘要：为了研究流产衣原体蛋白酶样活性因子（CPAF）的免疫原性，建立快速有效的流产衣原体抗体检测方法，根据GenBank中公布的流产衣原体基因组序列，设计并合成了流产衣原体CPAF蛋白编码基因的特异性引物，以流产衣原体标准菌株基因组为模板，经PCR扩增获得长度为1 809 bp目的基因片段；对获得的目的基因进行测序，并用生物信息学软件进行预测分析；再将该片段插入原核表达载体pET-30a中，经双酶切、测序鉴定；构建成功的表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），并用IPTG对目的蛋白进行诱导表达，通过对诱导条件的优化，确定诱导表达的最佳条件，表达产物用SDS-PAGE和Western Blot检测。结果显示，成功克隆流产衣原体CPAF蛋白的编码基因，该编码产物可能是定位于宿主细胞质中的一种衣原体分泌性蛋白酶，分子内具有多个可能的抗原表位；重组表达质粒经IPTG诱导后，表达分子质量为67.6 ku的CPAF蛋白，该重组蛋白能与抗His-tag单克隆抗体以及流产衣原体阳性血清特异性结合，具有良好的反应原性。结果表明，以大肠杆菌表达系统重组表达的流产衣原体CPAF蛋白具有良好的免疫原性，可作为动物流产衣原体病的血清学诊断及亚单位疫苗研究的候选抗原。

关键词：流产衣原体,CPAF,克隆,序列分析,原核表达,

基金资助：中央高校基本科研业务费（31920170158）；甘肃省科技计划项目（1504WKCA094）；科技部援助项目（KY201501005）