一种新型木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达

来源：华北农学报杂志2018年第4期北京时间：

作者：李琦, 成莉凤, 段盛文, 冯湘沅, 郑科, 杨琦, 刘志远, 彭源德

单位：1. 中国农业科学院 麻类研究所, 湖南 长沙 410205;；2. 湖南利尔康生物股份有限公司, 湖南 岳阳 414100;；3. 湖南农业大学 植物保护学院, 湖南 长沙 410128

摘要：为了获得新型木聚糖酶的高效分泌表达，在工程酶项目组前期原核表达了木聚糖酶基因xynA的基础上，将xynA基因（GenBank登录号：U57819）编码耐热性木聚糖酶成熟蛋白的部分序列克隆到pPICZαA表达载体上，转化毕赤酵母X33，成功构建真核表达体系，再分批加入0.5%（V/V）甲醇诱导毕赤酵母工程菌株产胞外木聚糖酶。结合木聚糖酶活力检测、SDS-PAGE电泳和Western Blot分析胞外木聚糖酶表达情况。结果表明，该XynA含有典型的糖苷水解酶11类催化结构域（GH11），成熟蛋白的预测分子量为38.6 ku，等电点为6.86；7个毕赤酵母基因工程菌株X33/pPICZαA-xynA分泌的木聚糖酶活力均≥300 U/mL，最高达487.2 U/mL；胞外木聚糖酶在SDS-PAGE和Western Blot检测的特征谱带分子量约为45 ku，均比预期分子量（38.6 ku）略大。一种新型木聚糖酶获得了高效分泌表达，为进一步分离纯化，研究其性质、结构和功能奠定了基础。

关键词：木聚糖酶基因,毕赤酵母,真核表达,Western Blot,

基金资助：国家自然科学基金项目（31700438）；湖南省自然科学基金项目（2016jj3126）；国家创新工程（ASTIP-IBFC08）；国家现代农业产业技术体系建设专项（CARS-16-E22）；湖南省战略性新兴产业科技攻关和重大科技成果转化项目（2014GK1041）