猪圆环病毒2型SYBRGreen Real-time qPCR检测方法的建立

来源：华北农学报杂志2018年第4期北京时间：

作者：冯华, 刘运超, 陈玉梅, 魏蔷, 张改平

单位：1. 河南省农业科学院 河南省动物免疫学重点实验室, 农业部动物免疫学重点实验室, 河南 郑州 450002;；2. 河南农业大学 牧医工程学院, 河南 郑州 450002;；3. 郑州大学 生命科学院, 河南 郑州 450001

摘要：为了建立一种基于SYBRGreen的猪圆环病毒2型（PCV2）荧光定量PCR诊断方法，以PCV2 ORF2基因序列为研究对象，构建pMD19T-ORF2重组质粒作为阳性标准品，设计特异性引物，对该方法的最适引物浓度、退火进行了优化，并对该方法的灵敏度、特异性、可重复性以及临床样品检出率进行了评价。结果表明，该方法引物的最佳终浓度为0.2 mol/L，最适退火温度为55℃；检测限可达到3.0×102个拷贝/mL，而普通PCR检测限在3.0×104个拷贝/mL；溶解曲线分析显示，在77~79℃有单一的溶解峰出现，并与CSFV、PPV、PRRSV、PRV没有交叉反应；组内重复性变异系数为0.29%～0.32%，组间变异系数为0.32%～0.36%；此外，该方法对临床样品的检出率为81.5%（31/38），而常规PCR为68.4%（26/38）。因此，相比常规PCR，该方法更为快速、灵敏、特异、稳定，更适合PCV2临床样品的检测，可为该PCV2早期感染的快速检测提供新方法。

关键词：猪圆环病毒2型,PCV2,ORF2,SYBRGreen Real-time qPCR,

基金资助：国家重点研发计划项目（2016YFD0500704）；河南省重点研发与推广专项（182102110087）