杏树李痘病毒病的快速分子检测和抗PPV连锁标记的筛选

来源：华北农学报杂志2018年第4期北京时间：

作者：张俊环, 孙浩元, Boris Krška, 杨丽, 姜凤超, 张美玲, 王玉柱

单位：1. 北京市林业果树科学研究院, 北京 100093;；2. 孟德尔大学 园艺学院, 布尔诺 69144

摘要：为快速检测引进杏资源是否携带李痘病毒（PPV），并从国内资源中筛选抗PPV材料，通过RT-PCR和荧光定量PCR 2种方法的比较验证，确定了RT-PCR为快速、准确、经济高效检测杏PPV病毒病的方法，并明确了PCR扩增体系和反应条件的具体参数。扩增体系为20 μL，包括10×Buffer 2 μL、25 mmol/L Mg2+ 1.6 μL、10 mmol/L dNTP 0.4 μL、0.5 U/μL Taq酶0.2 μL、上下游引物各0.4 μL、模板cDNA 1 μL、ddH2O 14 μL。RT-PCR反应条件：94℃预变性5 min，然后以94℃变性45 s、55℃退火30 s、72℃延伸45 s，进行35个循环，72℃延伸10 min。利用捷克孟德尔大学园艺学院构建的杏PPV抗性分离F1群体，采用SSR分子标记技术和集团分离分析法（BSA）相结合的策略，首先在抗PPV和易感PPV的对等基因间进行多态性标记的筛选，初步筛选得到6个SSR位点（PGS1.23、PGS1.24、PaCITA5、UDAP-414、Pchcms4和Pchgms4）在两亲本间和2个对等基因池间的多态性是一致的，并进一步在F1分离群体间进行复选和验证，最终筛选到1个与PPV抗性性状连锁程度较高的SSR分子标记PGS1.23，此标记检测杏资源分离群体PPV抗性的符合度达到了78.3%。进而利用该标记在37份我国杏种质中进行了PPV抗性评价，结果筛选出了5份抗PPV的杏资源，分别是菜籽黄、杨继元、垂枝山杏、大早熟和媳妇杏，为今后杏的抗PPV育种提供较好的亲本材料，也为进一步挖掘抗PPV基因的深度研究奠定了基础。

关键词：李痘病毒,杏,分子检测,SSR,BSA,

基金资助：国家林业局“948”项目（2013-4-50）；国家自然科学基金项目（31401836）；北京市自然科学基金项目（6162012）；北京市农林科学院青年基金项目（QNJJ201702）；北京市农林科学院科技创新能力建设专项（KJCX2016）