血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的原核表达及鉴定

来源：华北农学报杂志2018年第5期北京时间：

作者：刘娜, 刘青涛, 李银, 杨婧, 李祥瑞

单位：1. 江苏省农业科学院 兽医研究所, 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室, 国家兽用生物制品工程技术研究中心, 江苏 南京 210014;；2. 南京农业大学 动物医学院, 江苏 南京 210095

摘要：通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白；根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列，设计一对特异性引物，利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片段，在其两端插入酶切位点后克隆至载体pMD18T中，经PCR鉴定和测序分析正确后，与原核表达载体pET-32a进行连接，构建pET-32a-hexon原核表达载体，并对其进行双酶切和测序鉴定。将构建成功的表达载体转化至BL21（DE3）中，用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达，对得到的重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western Blot鉴定；经双酶切鉴定和测序鉴定，pET-32a-hexon原核表达载体构建成功，插入的六邻体蛋白基因片段大小为2 814 bp，在1 mmol/L浓度IPTG诱导3 h时重组蛋白表达量最高，且重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中。SDS-PAGE分析结果显示，融合蛋白分子量为118 ku。免疫印迹分析结果显示，融合蛋白可被抗FAdV-4的血清和HIS标签抗体特异性识别；成功表达了血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白，且得到的重组蛋白具有良好的反应原性，可用于血清4型禽腺病毒的进一步研究中，为血清4型禽腺病毒病的预防和治疗奠定了良好的基础。

关键词：血清4型禽腺病毒,六邻体蛋白,原核表达,

基金资助：国家重点研发计划（2017YFD0500800）