猪源Viperin基因的克隆、原核表达以及抗体的制备

来源：华北农学报杂志2018年第5期北京时间：

作者：方剑玉, 朱文豪, 李海利, 郭小参, 白献晓, 王克领

单位：1. 河南省农业科学院 畜牧兽医研究所, 河南 郑州 450002;；2. 南京农业大学 动物医学院, 江苏 南京 210095;；3. 普莱柯生物工程股份有限公司, 河南 洛阳 471000

摘要：为研究猪Viperin蛋白在猪体内的抗病毒活性，用IFN-α刺激PK-15细胞24 h，收集细胞提取RNA后，采用RT-PCR方法扩增猪Viperin基因，并连接至pEASY-blunt simple平末端连接测序载体，PCR鉴定后送公司测序正确。采用DNAStar分析猪Viperin蛋白的免疫原性和疏水性，选取抗原性较好的一段基因，采用PCR扩增后，插入pET-28a+大肠杆菌表达载体，在37℃条件下用IPTG诱导含有重组质粒的大肠杆菌BL21，SDS-PAGE分析证明，Viperin重组蛋白以包涵体的形式表达，包涵体蛋白经过纯化后得到目的蛋白，将纯化蛋白与弗式佐剂进行乳化后颈背部皮下注射9日龄的BALB/c小鼠，14 d后加强免疫一次，收集小鼠血清。采用Western Blot、IFA鉴定制备多克隆抗体的特异性，该多克隆抗体可以和阳性sViperin真核表达载体pCI-sVIP等表达的猪源Viperin蛋白进行特异性反应。试验成功克隆了猪Viperin基因，并制备了良好Viperin蛋白的多克隆抗体。

关键词：猪源-Viperin蛋白,原核表达,多克隆抗体,大肠杆菌,

基金资助：国家自然科学基金项目（31672565）；河南省农业科学院优秀青年科技基金（2018YQ21）