小反刍兽疫病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

来源：华北农学报杂志2018年第S1期北京时间：

作者：李林杰, 刘萍, 马鹏, 王悦萦, 郭富城, 马晓霞, 周建华, 柏家林

单位：1. 西北民族大学 生物医学研究中心, 甘肃 兰州 730030;；2. 西北民族大学 生命科学与工程学院, 甘肃 兰州 730030;；3. 中国农业科学院 兰州兽医研究所, 甘肃 兰州 730046

摘要：为了建立一种快速检测小反刍兽疫病毒的方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1株H基因序列设计2对引物，PCR扩增出1 830 bp H基因，构建标准质粒pMD-18-H。以标准质粒优化反应条件，建立了小反刍兽疫病毒H基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法。最优反应体系25 μL：2×SYBR qPCR Mix 12.5 μL，模板DNA 1 μL，特异引物各0.2 μL（0.2 μmol/L），DEPC H2O 10.5 μL；最佳反应条件：94℃ 2 min；94℃ 5 s，57℃ 30 s，40个循环，Ct值与标准质粒模板浓度在3.28×104~3.28×10-2 copies/μL 7个浓度梯度呈良好线性关系y=-2.913 x+36.904，斜率为-2.913，扩增效率120.5%，相关系数R2=0.994。建立的实时荧光定量PCR检测方法比普通PCR灵敏度高10 000倍，稳定性好，特异性强，对PPRV的准确诊断和定量检测具有重要意义。

关键词：小反刍兽疫病毒(PPRV),SYBR Green Ⅰ,实时荧光定量PCR,

基金资助：国家自然科学基金项目（31860696）；西北民族大学“双一流”引导专项-生物工程特色学科（10018703）；动物医学生物工程创新团队发展计划（IRT_17R88）；甘肃省科技计划项目（17YF1WA166）；国家自然科学基金项目（31260533）