杧果MiPAO基因的克隆表达分析及其基因沉默载体的构建

来源：华北农学报杂志2018年第S1期北京时间：

作者：刘宽亮, 赵志常, 罗睿雄, 陈业渊

单位：1. 海南大学 热带农林学院, 海南 海口 570228;；2. 中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所, 农业部华南作物基因资源与种质创制重点开发实验室, 海南 儋州 571737;；3. 国家热带果树品种改良中心, 海南 儋州 571737

摘要：为了探究杧果PAO基因在杧果果皮叶绿素降解中的作用，利用转录组测序得到PAO部分片段信息设计兼并引物，采取3'和5'cDNA末端快速克隆（RACE）的技术方法，选取了红色贵妃、黄色金煌、绿色桂七等3个不同着色杧果品种为试验材料，分别克隆得到了杧果果皮PAO基因的全长cDNA序列，生物信息学分析后将其命名为MiPAO。结果表明，3个着色品种cDNA序列只有几个碱基的差异，以红色贵妃品种为例，经过分析可得全长cDNA序列的大小为1 979 bp，开放阅读框大小为1 641 bp，总共编码546个氨基酸，其分子质量为61.82 ku，等电点为6.54。通过生物软件预测得到了MiPAO蛋白的二级结构和3种三级结构图，同时发现MiPAO蛋白为亲水性蛋白。对NCBI上登录的部分植物的PAO蛋白构建系统发育树发现MiPAO蛋白与橙子的亲缘关系近。成功构建出pTRV2-MiPAO基因沉默载体，希望能为后续研究杧果果皮着色的分子机理和桂七杧果的滞绿原因提供一定的试验支持。

关键词：杧果,<em>MiPAO</em>,叶绿素降解,病毒诱导的基因沉默,

基金资助：国家自然科学基金项目（31471850）；农业部热带作物种质资源保护（15RZZY-07）；948项目（2011-G13）；非营利性科研机构改革启动经费（CATAS；PZS-201225；CATAS-TCGRI；1630032013003）；2017年度海南省研究生创新科研课题（Hys2017-74）