玉米AGPL2蛋白多克隆抗体制备及时空表达分析

来源：华北农学报杂志2018年第6期北京时间：

作者：吕亚楠, 余国武, 黄玉碧

单位：1. 四川农业大学 农学院, 四川 成都 611130;；2. 四川农业大学 农学院 作物科学实验教学中心, 四川 成都 611130

摘要：为探讨玉米AGPL2在籽粒发育时期淀粉积累过程中的功能机制，通过AGPL2基因克隆和构建带有GST标签的原核表达载体PGEX-6T-1-AGPL2，并利用大肠杆菌诱导表达体系，用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）在28℃条件下诱导表达6 h后，GST-AGPL2融合蛋白能够得到高水平表达，然后利用GST（Glutathione S-transferase）标签蛋白纯化介质进行亲和层析纯化，能够得到质量较高的GST-AGPL2融合蛋白；利用纯化所得的GST-AGPL2重组蛋白免疫新西兰大白兔制备了AGPL2多克隆抗体，分离并纯化抗血清，然后用rTEV Protease去除抗原GST-AGPL2融合蛋白的GST标签，并用纯化后的AGPL2多克隆抗体进行Western Blot检测，结果发现，AGPL2多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性，可用于检测纳克级抗原蛋白；并利用Western Blot方法研究了AGPL2蛋白在玉米不同组织和不同授粉时期胚乳中的分布和表达模式，结果显示，AGL2蛋白在玉米不同组织中的表达具有组织特异性，且在胚乳中含量最高。AGPL2蛋白在玉米胚乳不同授粉时期表达量先增加后降低，且在授粉中期达到最大值。其结果与玉米籽粒发育过程中淀粉的积累规律一致，说明AGPL2主要存在于玉米胚乳中，且可能参与淀粉的合成，也说明AGPL2多克隆抗体具有很好的特异性，能够识别玉米体内的AGPL2抗原。

关键词：AGPL2蛋白,基因克隆,原核表达,Western Blotting,

基金资助：国家自然科学基金项目（31501322）；留学回国人员科技活动择优资助项目（00124300）；四川省博士后特别资助项目（03130104）