板栗CmWRKY基因的克隆、序列分析与原核表达

来源：华北农学报杂志2019年第4期北京时间：

作者：刘裕峰, 朱天辉, 刘应高, 谯天敏, 李姝江, 龙旭梅, 韩珊

单位：四川农业大学 林学院, 四川 成都 611130

摘要：为深入研究板栗WRKY转录因子基因在板栗抗病过程中的分子作用机制，根据板栗转录组数据库分析获得EST序列，利用RT-PCR技术，克隆板栗WRKY转录因子cDNA （CmWRKY）序列，分析CmWRKY基因及其编码蛋白的相关信息并进行原核表达研究。结果表明，CmWRKY基因为1 437 bp，编码479个氨基酸，推测蛋白分子质量为52.128 96 ku，理论等电点为9.15，具有2个WRKY保守结构域和2个C2H2锌指结构域，属于WRKY家族的第Ⅰ组，基因登录号为KY312850.1。CmWRKY核苷酸序列与巴旦木等植物的WRKY基因一致性均在80%以上，与西班牙栓皮栎WRKY基因一致性最高，达到97%。同源建模表明，CmWRKY蛋白三级结构与拟南芥AtWRKY1蛋白结构相似，推测其可能与AtWRKY1具有相似的调控功能。分子进化分析显示，板栗CmWRKY与西班牙栓皮栎及核桃WRKY蛋白亲缘关系最近。SDS-PAGE蛋白电泳分析表明，CmWRKY蛋白最佳诱导表达条件为0.2 mmol/L IPTG在30℃下诱导10 h，蛋白分子质量为56 ku，其主要以可溶性蛋白的形式存在。为板栗CmWRKY基因的生物学功能研究及应用奠定基础。

关键词：板栗,<i>CmWRKY</i>,基因克隆,序列分析,原核表达,

基金资助：国家自然科学基金项目（31400547）