马铃薯野生种SpSBP1基因的克隆及CRISPR/Cas9载体构建

来源：华北农学报杂志2022年第6期北京时间：

作者：陈娜, 邵勤, 李晓鹏, 高阳, 卢其能

单位：宜春学院 生命科学与资源环境学院,江西 宜春 336000

摘要：为了探究SBP1基因在植物自交不亲和方面的重要作用,以二倍体马铃薯野生种为材料,利用RT-PCR技术克隆获得马铃薯野生种 SpSBP1(登录号:MZ803088)的cDNA全长序列,并对其进行生物信息学分析及 CRISPR/Cas9载体构建。结果显示,SpSBP1基因的cDNA全长为1 176 bp,包含92 bp的5'非编码区和163 bp的3'非编码区,其最大开放阅读框为921 bp,编码306个氨基酸。蛋白结构域分析显示,SpSBP1蛋白包括Smc超家族结构域以及RING finger和Zinc finger结构域。蛋白同源序列比对及系统进化树分析显示,马铃薯野生种SpSBP1与马铃薯野生种ScSBP1的同源性最高,其次为花烟草。生物信息学分析显示,SpSBP1分子质量为34.731 44 ku,理论等电点pI为5.10,推测得出该蛋白为酸性不稳定亲水性蛋白。二级结构预测该蛋白主要由α螺旋和无规则卷曲所构成。同时该蛋白属于非分泌蛋白且不存在跨膜结构。从二倍体马铃薯野生种中克隆出了SpBP1基因,同时成功构建了CRISPR/Cas9载体,并进行了遗传转化试验。

关键词：马铃薯野生种,自交不亲和,<i>SpSBP1</i>,克隆,生物信息学分析,CRISPR/Cas9载体构建,

基金资助：江西省作物生长发育调控重点实验室开放基金项目(2210819005); 江西省教育厅科学技术项目(GJJ201618); 江西现代农业科研协同创新专项课题(JXXTCX201704-05)