九龙牦牛ELOVL3基因克隆、真核表达载体构建及组织表达谱分析

来源：华北农学报杂志2025年第2期北京时间：

作者：司比努尔·牙生江, 者玉琦, 钟金城, 武志娟, 柴志欣

单位：1 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室,四川 成都 610225；2 四川省青藏高原草食家畜工程技术中心,四川 成都 610225

摘要：极长链脂肪酸延伸酶3(ELOVL3)主要参与合成极长链脂肪酸(VLCFA),在脂肪酸代谢过程中扮演重要角色。旨为克隆九龙牦牛ELOVL3基因的蛋白编码序列,构建ELOVL3基因真核表达载体,并预测分析其生物学功能,通过PCR技术扩增九龙牦牛ELOVL3基因的CDS区序列,并通过同源重组将其插入到pcDNA3.1载体中以构建重组质粒。采用限制性酶切及PCR技术验证重组质粒,结合测序结果,利用在线预测软件分析其蛋白编码序列的生物学功能。另外,针对ELOVL3基因在mRNA水平和蛋白水平的表达量,进行qPCR和Western Blot检测。结果表明:九龙牦牛ELOVL3基因的蛋白编码序列全长813 bp,共编码270个氨基酸;酶切、PCR及测序鉴定,确认成功构建pcDNA3.1-ELOVL3 真核表达载体。生物信息学分析结果显示,ELOVL3基因编码蛋白属于疏水性蛋白,共有6个跨膜结构域及27个磷酸化位点。系统发育树显示,与九龙牦牛亲缘关系最近的是普通牛,最远的是原鸡。此外,ELOVL3基因在九龙牦牛肺脏组织中表达量最高。

关键词：牦牛,<i>ELOVL3</i>基因,基因克隆,真核表达载体构建,

基金资助：四川省科技计划项目(2024NSFSC0391); 中央高校基本业务项目(ZYN2023101); 西南民族大学青藏高原研究院项目(2024CXTD13)