红鳍东方鲀防御素db-1基因的原核表达分析

来源：大连海洋大学学报杂志2015年第1期北京时间：

作者：徐进, 仇雪梅, 高长富, 王秀利

单位：大连海洋大学 农业部北方海水增养殖重点实验室，辽宁 大连 116023

摘要：采用原核表达方法高效表达红鳍东方鲀Takifugu rubripes防御素db-1基因，并获得该基因的重组表达产物。通过RT-PCR扩增获得红鳍东方鲀防御素db-1基因成熟肽编码序列，将其连入pET32a+载体，构建原核表达载体pET32a-mDB-1，然后将其转入至大肠杆菌表达菌株Rosetta(DE3)感受态细胞中，经IPTG诱导目的基因表达,通过SDS-PAGE和Western Blotting检测该蛋白，并利用Ni-NTA亲和层析纯化该蛋白，最后以Anti-Mus defensin Beta2抗体为探针的Elisa反应鉴定该蛋白。结果表明：红鳍东方鲀db-1基因在大肠杆菌中高效表达，并纯化得到了这种重组防御素融合蛋白。本研究中提供了一种简单、高效获取重组防御素蛋白的方法，可为其应用和生产提供支持。

关键词：红鳍东方鲀,防御素,原核表达,Elisa分析