红鳍东方鲀白介素15的原核表达及其活性测定

来源：大连海洋大学学报杂志2015年第6期北京时间：

作者：孙赛红, 马普, 李慧, 孙鹤, 孔德荣, 李凤华, 仇雪梅, 姜志强, 刘海映

单位：大连海洋大学水产与生命学院大连三仪动物药品有限公司大连海洋大学海洋科技与环境学院大连天正实业有限公司

摘要：为了开发红鳍东方鲀Takifugu rubripes免疫基因及其重组表达,生产重组免疫因子蛋白,通过提取红鳍东方鲀肾脏组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到白介素15（interleukin15,IL15）基因序列,将IL15成熟肽序列与原核表达载体p ET-32a（＋）连接,成功构建重组表达载体（重组子）p ET-32a（＋）-IL15,并将其重组子转化至Escheria coli BL21（DE3）感受态细胞中获得重组表达IL15的基因工程菌,再经IPTG诱导,p ET-32a（＋）-IL15在BL21中得到了融合表达。结果表明：通过对表达产物的纯化和Western Blotting检测,红鳍东方鲀IL15在大肠杆菌中的表达量较高,蛋白浓度为294.6μg/m L;用MTT法对该蛋白进行活性鉴定显示,加入稀释10倍和100倍的重组红鳍东方鲀IL15蛋白时,CTLL-2细胞的增殖率相对较高,分别为71%和73%。研究表明,重组红鳍东方鲀IL15蛋白具有体外促进CTLL-2细胞增值的能力。

关键词：红鳍东方鲀,白介素-15,原核表达,活性鉴定