Cas9-CRISPR敲除hae3基因对斑马鱼血红蛋白生成的影响

来源：大连海洋大学学报杂志2015年第6期北京时间：

作者：蔡畅, 王丛丛, 吴智超, 刘云, 郭亚南, 许强华

单位：上海海洋大学海洋科学学院大洋渔业资源可持续开发省部共建教育部重点实验室农业部大洋渔业资源环境科学观测实验站国家远洋渔业工程技术研究中心远洋渔业协同创新中心

摘要：为获得hae3基因缺失的突变体,并研究hae3基因对血红蛋白生成的影响,以斑马鱼Danio rerio为研究对象,利用Cas9-CRISPR技术,成功建立了缺失血红蛋白hae3基因的鱼类模型,采用显微注射技术将hae3 sgRNA与Cas9 RNA混合后对斑马鱼第一细胞期受精卵动物极进行注射,利用序列测定与比对、T7核酸酶酶切方法成功检测到了hae3基因的敲除,并对缺失hae3基因的斑马鱼和对照组斑马鱼同时进行固蓝（O-dianisidine）染色。结果表明,与对照组相比,试验组斑马鱼血红蛋白含量明显下降,并有畸形表型。研究表明,胚胎时期hae3基因的缺失会严重影响斑马鱼血红蛋白的生成,而且伴随畸形发育表型。

关键词：斑马鱼,血红蛋白,hae3基因,Cas9-CRISPR,基因敲除,固蓝染色