红鳍东方鲀gsdf基因的克隆及表达模式分析

来源：大连海洋大学学报杂志2016年第2期北京时间：

作者：闫红伟, 田雨顺, 姜丽楠, 王连顺, 刘洋, 刘奇, 刘圣聪

单位：1.大连海洋大学水产与生命学院，辽宁大连116023；2.大连海洋大学辽宁省海洋牧场工程技术研究中心，辽宁大连116023；3.大连天正实业有限公司，辽宁大连116000

摘要：为研究红鳍东方鲀Takifugu rubripes的性别决定因子 （gonadal soma derived factor，GSDF），利用cDNA末端快速扩增技术 （RACE）首次克隆了红鳍东方鲀gsdf基因 （Trgsdf）的cDNA全长序列 （GenBank登陆号：KR914667）。结果表明：Trgsdf cDNA序列全长为1734 bp，其中5′端非编码区144 bp，开放阅读框648 bp，3′端非编码区942 bp，共编码215个氨基酸；预测的氨基酸序列中存在1个长度为19个氨基酸的信号肽和相同长度的跨膜区，1个N-糖基化位点NST，1个TGF-β家族成员特有的保守结构域；BLAST同源性分析结果显示，红鳍东方鲀GSDF氨基酸序列与其他鱼类的相似性为26％～58％；系统发育分析结果显示，鱼类GSDF单独聚为一支，与TGF-β超家族内的其他成员分开，红鳍东方鲀与青鳉Oryzias latipes GSDF的亲缘关系最近，先聚为一支，后与三斑海猪鱼Halichoeres trimaculatus聚在一起，与矛尾鱼Latimeria menadoensis的GSDF亲缘关系最远；应用RT-PCR技术检测Trgsdf mRNA在雌性和雄性红鳍东方鲀成鱼不同组织中的表达，结果显示，Trgsdf mRNA在卵巢和精巢中高表达，在皮肤和肌肉组织中微量表达，在其他组织中无表达；采用相对实时荧光定量PCR方法比较了成鱼卵巢和精巢中Trgsdf mRNA的表达量，结果显示，Trgsdf mRNA在精巢中的表达量显著高于卵巢 （P＜0.05），约为卵巢表达量的6倍。研究表明，gsdf基因可能在红鳍东方鲀的性腺尤其是精巢的分化和发育过程中起着重要的作用。

关键词：红鳍东方鲀,性别决定因子,cDNA末端快速扩增技术,实时荧光定量PCR,基因表达