不同保存方法对武汉单极虫DNA提取和PCR扩增的影响

来源：大连海洋大学学报杂志2016年第3期北京时间：

作者：陆宏达, 刘俊杰, 岳蒙蒙, 操艮萍, 李振伟

单位：上海海洋大学水产与生命学院，上海201306

摘要：为探讨不同保存方法对武汉单极虫Thelohanellus wuhanensis DNA提取和PCR扩增的影响，将从患武汉单极虫病的异育银鲫Carassius auratus gibelio鱼苗上分离出含有孢子的孢囊，分别置于100%乙醇、70%乙醇、2.5%戊二醛、10%福尔马林、Bouin’s液、Carnoy’s液和Müller’s液中保存50 d，经计数调整孢子等量后分别进行DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增。结果表明：100%乙醇和70%乙醇保存方法对武汉单极虫孢子DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增均无任何影响，等同于新鲜孢子，可作为孢子的保存方法；2.5%戊二醛和Bouin’s液保存方法只对孢子DNA提取有影响，但均能在常规PCR和巢式PCR扩增后出现特异电泳条带，可作为用于常规PCR和巢式PCR扩增的孢子保存方法；10%福尔马林和Müller’s液保存方法对孢子DNA提取和常规PCR扩增均有影响，但均能在巢式PCR扩增后出现特异电泳条带，故只能作为用于巢式PCR扩增的孢子保存方法；Carnoy’s液保存方法无论在孢子DNA提取还是进行常规PCR和巢式PCR扩增均无阳性结果，故不能用作孢子核酸分子生物学研究的保存方法。研究表明，除100%乙醇和70%乙醇保存方法外，其他保存方法对孢子DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增均有不同程度的影响。

关键词：保存方法,武汉单极虫,DNA提取,PCR扩增