虹鳟传染性胰脏坏死病毒的分离鉴定及聚类分析

来源：大连海洋大学学报杂志2017年第1期北京时间：

作者：刘淼, 徐黎明, 赵景壮, 曹永生, 刘红柏, 尹家胜, 卢彤岩

单位：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070

摘要：为研究传染性胰脏坏死病毒 (IPNV)感染虹鳟Oncorhynchus mykiss的病理特性,取云南省某养殖场大规模死亡的虹鳟稚鱼进行了病原的分离与鉴定,试验中利用鲑鳟鱼常见病毒敏感细胞大鳞大麻哈鱼胚胎细胞 (Chinook salmon embryo cells,CHSE-214)、鲤上皮瘤细胞 (Epitheliaoma papulosum cyprinid,EPC)和虹鳟性腺细胞 (Rainbow trout gonad cell line,RTG-2)对虹鳟稚鱼无菌组织悬液进行病毒培养,并对产生细胞病变的上清进行病毒RNA提取及鲑鳟鱼常见病毒的RT-PCR检测,利用敏感细胞进行病毒分离株的噬斑培养及滴度测定,并对病毒形态进行透射电镜观察。结果表明:细胞培养显示,该组织悬液能使CHSE-214和RTG-2细胞产生明显的细胞病变;RT-PCR结果显示,检测样本呈IPNV阳性,传染性造血器官坏死病毒(IHNV)呈阴性;该IPNV分离株(命名为ChRtm213)在CHSE-214、RTG-2和EPC细胞上的病毒滴度分别为105.2、103.2、102.3TCID50/mL,在CHSE-214细胞上培养4 d即可形成肉眼可见的病毒噬斑;在透射电镜下清晰可见大量病毒粒子呈晶格状排列于细胞质内;ChRtm213分离株与西班牙毒株2310 (AY489225)VP2相似度较高,核苷酸序列一致性为96.4%;聚类分析结果显示,ChRtm213分离株与参考毒株加拿大Jasper(ATCC:VR-1325)聚为一簇,属于Gengroup 5基因型。研究表明,ChRtm213分离株异于已报道的IPNV分离株,具有不同的血清型及病毒毒力,可为传染性胰脏坏死病毒的检测及防控提供参考。

关键词：虹鳟,传染性胰脏坏死病毒(IPNV),CHSE-214,基因型

基金资助：黑龙江省应用技术研究与开发计划项目 (GA13B401);黑龙江省自然科学基金资助项目 (C201462);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 (HSY201514)