杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系的建立及应用

来源：大连海洋大学学报杂志2018年第1期北京时间：

作者：周贺, 庄子昕, 查荒源, 梁雨婷, 徐其征, 张蕊, 林忠乔, 李雅娟

单位：大连海洋大学辽宁省省级高校海洋生物资源可持续利用重点实验室，农业部北方海水增养殖重点实验室，辽宁大连116023

摘要：为研究杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的形成机制，探寻其产业化生产的有效途径，通过对GISH的多项试验参数进行优化，建立杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系，并对天然四倍体泥鳅(4n＝100)与大鳞副泥鳅Paramisgurnus dabryanus(2n＝48)正、反杂交后代进行GISH分析。结果表明：杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系中，探针DNA在温度为105℃、持续时间为2 min时，片段化后探针DNA片段长度为500～1000 bp；封阻DNA在温度为110℃、持续时间为10 min时，片段长度为100～500 bp；标记后的探针DNA与片段化后的封阻DNA混合比 (P/B)在1∶25和1∶50时均可以得到较好的杂交信号；以大鳞副泥鳅全基因组DNA为探针DNA、天然四倍体泥鳅全基因组DNA为封阻DNA，与二者正、反交后代进行基因组原位杂交试验，结果显示，来源于亲本大鳞副泥鳅24条染色体在着丝点处均有杂交信号，无杂交信号染色体50条，来源于亲本泥鳅。该研究结果不仅为杂交三倍体泥鳅后代的鉴定提供了最直观的证据，也为中国天然四倍体泥鳅是含有四套染色体组的遗传四倍体并能产生2n的配子提供了分子细胞遗传学基础数据，对泥鳅三倍体育种研究具有一定的指导意义。

关键词：天然四倍体泥鳅,大鳞副泥鳅,杂交三倍体,基因组原位杂交(GISH)