杂合抗菌肽Scy-Hep3在毕赤酵母中的分泌表达及其抗菌活性

来源：大连海洋大学学报杂志2018年第5期北京时间：

作者：彭会, 王克坚

单位：厦门大学 海洋与地球学院，福建 厦门海洋生物制备技术国家地方联合工程实验室，福建 厦门

摘要：为获得体外稳定表达的高抗菌活性新型抗菌肽，通过重叠延伸PCR技术获得了拟穴青蟹抗菌肽Scygonadin(简记为Scy)和斜带石斑鱼抗菌肽Hepcidin 3(简记为Hep3)的杂合抗菌肽基因scygonadin-hepcidin3(简记为scy-hep3)，将scy-hep3与毕赤酵母Pichiapastoris的pPIC9K质粒连接，构建了分泌型表达载体pPIC9K-scy-hep3，用电转化法将其转化至毕赤酵母GS115菌中，经甲醇诱导表达和亲和纯化后获得杂合抗菌肽Scy-Hep3，并进行抗菌活性分析。结果表明：本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-scy-hep3，用体积分数为0.5%的甲醇诱导表达24 h，分泌表达上清液中获得了稳定表达的相对分子质量约24 000的表达产物，与预期杂合抗菌肽Scy-Hep3的大小相符；抗菌活性结果表明， 杂合抗菌肽Scy-Hep3具有广谱抗菌活性，对被测的3种革兰氏阳性菌(溶壁微球菌Micrococcuslysodeikticus、谷氨酸棒杆菌Corynebacteriumglutamicum和金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus)和4种革兰氏阴性菌(施氏假单胞菌Pseudomonasstutzeri、荧光假单胞菌Pseudomonasfluorescens、嗜水气单胞菌Aeromonashydrophila和弗氏志贺氏菌Shigellaflexneri)具有较强的抗菌活性(最小抑菌浓度MIC<12 μmol/L)；对比于单一的抗菌肽Scy和Hep3，杂合抗菌肽Scy-Hep3的抗菌活性显著增强。本研究结果将为杂合抗菌肽Scy-Hep3的生产和开发应用提供数据资料。

关键词：杂合抗菌肽,毕赤酵母,重组表达,抗菌活性