红鳍东方鲀鳍细胞系的建立及生长特性研究

来源：大连海洋大学学报杂志2018年第6期北京时间：

作者：王缙云, 李霞, 秦艳杰, 李状状, 张晓雨, 梁艳, 姜志强

单位：1.大连海洋大学辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室，辽宁大连116023；2.大连海洋大学农业农村部北方海水增养殖重点实验室，辽宁大连116023

摘要：为研究红鳍东方鲀Takifugurubripes鳍细胞系对该鱼病毒病诊断和治疗的影响，采用组织块培养法启动红鳍东方鲀鳍组织细胞的原代培养，用胰蛋白酶消化法进行传代培养，目前红鳍东方鲀鳍细胞传至40代，为成纤维细胞样细胞，原代培养和早期传代培养使用的培养基为添加了20%胎牛血清的DMEM/F12高糖培养基，添加的生长因子分别为终浓度为10ng/mL的人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、终浓度为20ng/mL的Ⅰ型胰岛素样生长因子和终浓度为20μg/mL的硫酸软骨素,30代以后使用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基，将细胞于25℃、5% CO2恒温培养箱中培养。结果表明：生长曲线显示，细胞在0～2d内处于潜伏期，2～4d时进入对数期，4～5d时进入平台期，5d后开始转入衰退期；红鳍东方鲀鳍细胞系的倍增时间为50.24h；细胞经超低温保存60d，解冻复苏后测定其存活率为80%；经微卫星位点扩增，凝胶电泳后的条带证实细胞系来源于红鳍东方鲀。研究表明，红鳍东方鲀鳍细胞系的建立丰富了鱼类细胞系的种类，也为红鳍东方鲀病毒病的研究及疫苗制备等提供了数据资料。

关键词：长额象鼻溞,密云水库,种群动态,时空变化