斑马鱼Tg（Crystal-pro-gsdf-2A-egfp）质粒的构建及验证

来源：大连海洋大学学报杂志2018年第6期北京时间：

作者：郭安宁, 关桂君, 王映, 孙凯庆, 陈良标

单位：上海海洋大学 教育部水产种质资源发掘与利用重点实验室，海洋生物国际科学研究中心，上海

摘要：为研究性腺体衍生因子基因(gsdf)在斑马鱼Daniorerio精巢发育过程中相关分子调控机制模型，提取了斑马鱼精巢总RNA，逆转录合成 cDNA，并以其为模板，用RT-PCR法扩增得到gsdf基因，构建了以小鼠gamma-crystalin启动子启动的斑马鱼gsdf基因与增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)融合的荧光素酶报告质粒Tg(Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)，采用显微注射技术注射该质粒至1细胞期的斑马鱼受精胚胎中。结果表明：在荧光显微镜下观察到19尾能在眼部晶状体中特异表达绿色荧光蛋白基因(gfp)的F0代斑马鱼，将表达了绿色荧光蛋白基因的斑马鱼同野生型(WT)非转基因斑马鱼杂交，最终获得能特异表达绿色荧光蛋白基因的F2代，且gsdf基因能在斑马鱼眼部晶状体中特异表达并稳定遗传。研究表明，在斑马鱼上建立的Tg(Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)转基因品系，为研究和观察斑马鱼精巢发育的分子调控机制提供了新的方法。

关键词：斑马鱼,低氧,转录组分析,热休克蛋白,Hsp47基因,Hsp90ab1基因