尖裸鲤实时荧光定量PCR内参基因的筛选

来源：大连海洋大学学报杂志2019年第3期北京时间：

作者：孙海成, 吕晓楠, 佟广香, 尹家胜, 薛淑群, 张丽娜, 韩英

单位：东北农业大学动物科学技术学院北京市水产技术推广站中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

摘要：为筛选能够稳定表达的内参基因用于尖裸鲤Oxygymnocypris stewarti实时荧光定量PCR分析,以尖裸鲤血液、心脏、肝、脾、鳃、头肾、中肾、后肾、前肠、中肠、后肠、性腺、眼、垂体、脑、红肌、白肌和皮肤18个组织为材料,应用实时荧光定量PCR技术比较了GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)、HPRT1(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶1)、RPL13(核糖体蛋白L13)、RPL19(核糖体蛋白L19)、RPL13a(核糖体蛋白L13a)、SDHA(琥珀酸脱氢酶亚基A)和ACTB(β-肌动蛋白)7个候选内参基因的表达情况,并采用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件对7个候选内参基因的稳定性进行分析。结果表明:GeNorm分析显示,7个候选内参基因的平均表达稳定值(M)依次为RPL13=RPL13a<RPL19<GAPDH<ACTB<SDHA<HPRT1,其中RPL13和RPL13a的M值均最小(0.62);NormFinder分析显示,7个候选内参基因的M值依次为RPL13<RPL13a<RPL19<GAPDH<ACTB<SDHA<HPRT1,其中RPL13的M值最小(0.30);BestKeeper分析显示,7个候选内参基因的标准差(S.D.)依次为RPL13<RPL19<GAPDH<HPRT1<RPL13a<SDHA<ACTB,变异系数(CV)值依次为RPL13<RPL19<HPRT1<GAPDH<SDHA<RPL13a<ACTB,其中RPL13的标准差(0.84)和变异系数(4.54%)均最小;7个候选内参基因在尖裸鲤不同组织中的表达量存在差异。研究表明,7个内参基因中RPL13的表达较为稳定,可作为尖裸鲤实时荧光定量PCR分析的适宜内参基因,本研究结果可为尖裸鲤遗传学及分子生物学等研究提供基础数据。

关键词：尖裸鲤；实时定量PCR；内参基因