传染性胰脏坏死病毒VP2蛋白酵母表面展示系统的建立

来源：大连海洋大学学报杂志2019年第5期北京时间：

作者：贺文斌, 徐黎明, 赵景壮, 刘淼, 任广明, 卢彤岩, 尹家胜

单位：1.上海海洋大学 水产科学国家级实验教学示范中心，上海 201306；2.中国水产科学研究院 黑龙江水产研究所，黑龙江 哈尔滨 150070；3 上海海洋大学 农业农村部渔业动植物病原库，上海 201306

摘要：为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous，IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面，本研究中基于IPNVVP2基因序列设计引物，以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PCR扩增，然后将扩增产物连接到酵母表面展示载体pYD1上构建了重组质粒pYD1-VP2，将重组质粒转化至酵母EBY100感受态细胞中，得到含有重组质粒的酵母菌EBY100/pYD1-VP2，再向EBY100/pYD1-VP2中加入半乳糖进行VP2蛋白的诱导表达，并采用蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光技术对VP2蛋白的酵母表面展示情况进行了分析。结果表明：经半乳糖诱导后VP2蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达；细胞免疫荧光分析显示，重组酵母诱导表达后出现特异性绿色荧光，并且在一定时间内荧光强度与诱导时间成正相关，诱导24、36、48 h组及对照组(48 h)各组之间荧光酵母比例有显著性差异(P<0.05)。研究表明，IPNV VP2蛋白已经被酵母细胞高效表达并且成功展示于酵母细胞表面，本研究结果可为IPNV口服活载体疫苗的研制奠定基础。

关键词：传染性胰脏坏死病毒,VP2,酵母表面展示,细胞免疫荧光

基金资助：中央公益性事业单位基本科研业务费专项(2016HY-ZD0504)；中国博士后科学基金资助项目(198920)；国家自然科学基金资助项目(31802345)