太平洋鳕抗菌肽Hepcidin基因克隆及体外表达研究

来源：大连海洋大学学报杂志2020年第1期北京时间：

作者：吴玲梅, 顾杰, 温智清, 贾鹏, 刘瑞婷, 蒋洁兰, 刘荭, 郑晓聪, 毛明光

单位：1.大连海洋大学 农业农村部北方海水增养殖重点实验室，辽宁省北方鱼类应用生物学与增养殖重点实验室；2.深圳海关动植物检验检疫技术中心；3.深圳市检验检疫科学研究院

摘要：为揭示太平洋鳕Gadusmacrocephalus抗菌肽Hepcidin(GmHep)的分子结构和表达特性，利用qPCR法对平均体质量为2.438 kg鳕不同组织和发育早期的GmHep表达模式进行了探讨，分别构建了原核(pET-32a-GmHep)和真核(pEGFP-GmHep)表达载体，研究了GmHep的体外表达特点。结果表明：GmHep基因开放阅读框长为297 bp，编码98个氨基酸，蛋白相对分子质量为10 833.56，该肽N端具22个氨基酸残基的信号肽，成熟肽含有8个半胱氨酸残基、4个二硫键；氨基酸序列比对发现，GmHep与大西洋鳕Hepcidin同源性最高(93%)，但与其他鱼类Hepcidin同源性较低(小于60%)，预示其功能具有独特性；GmHep在肝脏中的表达量显著高于其他组织(P<0.05)，且GmHep在5、10、30、37、40日龄仔稚鱼中均有表达(P<0.05)；GmHep体外诱导表达优化条件为IPTG浓度0.01 mmol/L、30 ℃、诱导4 h；GmHep在EPC细胞系中主要定位在细胞质中。研究表明，本研究成功构建了两种GmHep体外表达载体，确定GmHep为肝分泌型，且在太平洋鳕发育早期发挥一定作用。

关键词：太平洋鳕,抗菌肽,原核表达,亚细胞定位

基金资助：辽宁省高等学校创新人才项目(LR2016009)；辽宁省教育厅科研项目(JL2019021,QL201702)