传染性胰脏坏死病酵母展示疫苗的免疫效果评价

来源：大连海洋大学学报杂志2020年第6期北京时间：

作者：董莹, 贺文斌, 赵景壮, 任广明, 卢彤岩, 邵轶智, 徐黎明

单位：1.上海海洋大学 水产科学国家级实验教学示范中心，上海 201306； 2.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江 哈尔滨 150070； 3.上海海洋大学 国家水生动物病原库，上海 201306； 4.黑龙江省水生动物病害与免疫重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150070

摘要：为了评价前期构建的传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)VP2蛋白酵母展示疫苗(EBY100/pYD1-VP2)的免疫保护效果，以虹鳟Oncorhynchusmykiss为试验动物分析了口服免疫的保护效力，利用流式细胞仪和细胞免疫荧光检测方法确定疫苗株的最佳诱导时间为60 h，然后大量制备酵母口服疫苗，分别利用单次和多次口灌的方式对虹鳟进行免疫；单次免疫为连续免疫7 d，多次免疫为单次免疫一周后再以相同剂量免疫7 d，免疫剂量均为每天100 μL 疫苗菌(1×1010CFU/mL)，同时设置空载体酵母菌免疫组和PBS模拟免疫组，通过免疫相关基因定量、中和抗体滴定及攻毒后IPNV病毒载量分析口服疫苗的保护效果。结果表明：疫苗株免疫组虹鳟头肾、后肠中的免疫相关基因IgM、IgT、CD4、CD8在各时间点的表达量均显著高于空载体酵母菌免疫组和PBS模拟免疫组(P<0.05)，且与单次免疫组相比，多次免疫组免疫相关基因表达量显著升高(P<0.05)；在疫苗株免疫组虹鳟血清中均发现了中和抗体，其中，多次免疫组各时间点血清中和抗体效价均高于单次免疫组，免疫后第49天时IPNV中和抗体效价达到最高(39.28)；病毒载量分析显示，各时间点疫苗株免疫组VP1和VP2基因表达量显著低于空载体酵母免疫组(P<0.05)，并且在第14天、第21天时，疫苗株单次免疫组VP1和VP2基因表达量分别为疫苗株多次免疫组基因表达量的2.25、3.33倍(VP1)和2.67、2.80倍(VP2)。研究表明，该口服疫苗可诱导虹鳟产生非特异性和特异性免疫应答，对虹鳟具有显著的免疫保护作用。

关键词：虹鳟,传染性胰脏坏死病毒,酵母展示,口服疫苗

基金资助：中央公益性事业单位基本科研业务费专项(HSY201901M)；国家自然科学基金(31802345)；中国博士后科学基金(2018M630893，2019T12027)