一种海洋来源蜡样芽孢杆菌α-半乳糖苷酶基因的克隆表达及功能鉴定

来源：大连海洋大学学报杂志2021年第1期北京时间：

作者：江超峰, 李悝悝, 李唐, 车佳, 尹恒

单位：1.中科院大连化学物理研究所 辽宁省碳水化合物重点实验室，大连市糖类农用制剂工程研究中心，辽宁 大连 116023； 2.中国科学院大学 化学科学学院，北京 100049； 3.大连海洋大学 食品科学与工程学院，辽宁 大连 116023

摘要：为获得高效的α-半乳糖苷酶并了解其功能，采用基因工程技术，从鹿角菜中筛选获得的蜡样芽孢杆菌Bacilluscereus中克隆得到一个新的α-半乳糖苷酶基因(BcgalA)，并在EscherichiacoliBL21(DE3)中成功进行了重组表达。结果表明：BcgalA基因序列编码441个氨基酸，预测的BcGalA蛋白相对分子质量约为50 380，生物信息学分析显示，该酶属于GH4家族；酶活试验表明，在37 ℃、pH 8.0条件下该酶水解4-硝基苯基-α-D-吡喃半乳糖苷(pNP-α-Gal)、棉子糖的比活力分别为(1.498±0.034)、(0.261±0.012)U/mg，但对半乳甘露聚糖无水解活性。研究表明，本研究中克隆表达的BcGalA是一种属于GH4中仅对低分子量底物起作用的α-半乳糖苷酶，为探究GH4 α-半乳糖苷酶的结构与功能关系提供了样本。

关键词：蜡样芽孢杆菌,α-半乳糖苷酶,GH4,克隆表达,催化机制

基金资助：国家重点研发计划项目(2017YFD0200902);国家自然科学基金(31770847);中国科学院重点部署项目(KFZD-SW-113)