鳗鲡疱疹病毒ORF8基因的克隆表达及转录时相分析

来源：大连海洋大学学报杂志2021年第1期北京时间：

作者：陈曦, 李英英, 陈强, 宋铁英, 葛均青

单位：福建省农业科学院生物技术研究所，福建 福州 350003

摘要：为研究鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus，AngHV)ORF8基因的特性，根据GenBank中AngHV参考株(NC_013668)的ORF8序列设计引物，采取PCR方法从分离的AngHV福建病毒株(AngHV-FJ)基因组中扩增出特异性片段，克隆至pMD19-T载体，经酶切和测序验证，获得了ORF8的基因序列。结果表明：经生物信息学分析，ORF8编码的蛋白稳定性较好，存在跨膜结构且抗原表位多，符合病毒囊膜蛋白的特征；经转录时相分析，ORF8是病毒的早期基因 (early gene, E)，可能在病毒感染的早期阶段就发挥作用；将ORF8克隆至表达载体pET-32a,转化入大肠杆菌E.coliBL21中，以IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE及Western blot检验，实现了ORF8在大肠杆菌中的高效表达，进一步通过割胶的方法获得了相对分子质量约为44 000的高纯度融合表达蛋白。本研究为下一步评价该表达蛋白的免疫效果和制备抗体，以及开发免疫诊断试剂和疫苗提供了研究基础。

关键词：鳗鲡疱疹病毒,ORF8基因,转录时相,克隆,原核表达

基金资助：国家自然科学基金(31101933)；福建省公益类科研院所基本科研专项(2017R1019-5，2018R1019-5)；福建省农业科学院项目(AC2017-1，A2016-3)