鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF4蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其免疫原性分析

来源：大连海洋大学学报杂志2021年第3期北京时间：

作者：孟少东, 姜新宇, 葛恒, 胡光耀, 杨大佐, 张家林 , 李强

单位：1.大连海洋大学 农业农村部北方海水增养殖重点实验室，辽宁 大连 116023； 2.盐城工学院 海洋与生物工程学院，江苏 盐城 224051

摘要：为进一步研究鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2)ORF4蛋白的功能，通过PCR扩增CyHV-2ORF4基因，并构建重组穿梭质粒pFastBac HTA-ORF4，将其转化至大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞后获得重组杆粒Bacmid-ORF4；采用脂质体法转染Sf9细胞后，利用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot鉴定重组蛋白，采用His亲和层析柱纯化重组蛋白，并通过小鼠免疫试验分析其免疫原性。结果表明：转染72 h后Sf9细胞逐渐呈现出细胞变圆、细胞核明显增大的形态变化；间接免疫荧光结果显示，重组杆状病毒感染的Sf9细胞中出现了明显的绿色荧光；Western blot结果显示，纯化的CyHV-2 ORF4蛋白能够与抗His单抗发生特异性反应；小鼠免疫试验显示，纯化的CyHV-2 ORF4蛋白能诱导小鼠产生特异性免疫反应。研究表明，本研究中获得的CyHV-2 ORF4蛋白有较好的免疫原性，为CyHV-2 ORF4蛋白的功能解析提供了良好材料。

关键词：鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2),杆状病毒表达,ORF4蛋白,免疫原性

基金资助：江苏省自然科学基金青年基金(BK20181053)；江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(18)3028)；盐城工学院人才引进项目(xjr2019044)