尼罗罗非鱼CD209基因的克隆、表达及功能鉴定

来源：大连海洋大学学报杂志2021年第3期北京时间：

作者：罗国玲, 王孝谦, 简纪常, 鲁义善, 汤菊芬, 黄瑜

单位：1.广东海洋大学 水产学院，广东 湛江 524088； 2.广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，广东 湛江 524088； 3.水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室，广东 湛江 524088

摘要：为揭示尼罗罗非鱼模式识别受体CD209的分子结构、组织表达特性并初步了解其免疫功能，利用聚合酶链式反应(PCR)获得尼罗罗非鱼Oreochromisniloticus(体质量为100 g±5 g)CD209基因的开放阅读框片段(open reading frame，ORF)，命名为OnCD209；使用生物信息学软件对其氨基酸序列进行分析，采用RT-qPCR法对健康尼罗罗非鱼的各组织及无乳链球菌刺激后尼罗罗非鱼肝脏、脾脏、鳃和肠道的CD209基因表达量进行分析，并构建了CD209-pEGFP-N1及CD209-pcDNA3.1载体，研究了CD209基因在293T细胞中的定位及在细胞中过表达时对NF-κB酶活性的影响。结果表明：OnCD209的ORF区片段长度为1 383 bp，可编码460个氨基酸，预测该蛋白具有一个C型凝集素结构域；多重氨基酸序列比对及系统进化分析显示，CD209氨基酸序列在各物种间相对不保守，尼罗罗非鱼与田纹狮子鱼Liparistanakae的CD209氨基酸序列聚为一支，亲缘关系最近；RT-qPCR结果显示，所有组织(脑、血液、皮肤、肌肉、头肾、肠道、鳃、肝脏、脾脏和胸腺)中均能检测到OnCD209的mRNA表达，且在血液中表达量最高；尼罗罗非鱼在受到无乳链球菌感染后，OnCD209的表达在各组织中呈现相似的变化趋势，大致呈先在6 h时上调，后在12、24 h时下调，再在48 h后上调的表达模式；亚细胞定位分析显示，OnCD209定位于细胞膜上；双荧光素酶报告基因系统检测发现，OnCD209对NF-κB通路的活性显著性激活。研究表明，OnCD209可能参与尼罗罗非鱼对细菌的免疫应答过程及炎症反应过程。

关键词：尼罗罗非鱼,模式识别受体,荧光定量PCR,基因克隆,亚细胞定位,NF-κB

基金资助：国家重点研究发展计划“蓝色粮仓科技创新”项目(2018YFD0900501)；南方海洋科学与工程广东实验室(湛江)项目(ZJW-2019-06)