传染性胰脏坏死病毒VP3抗血清的制备及应用

来源：大连海洋大学学报杂志2021年第4期北京时间：

作者：陈桂花, 贺文斌, 徐黎明, 赵景壮, 任广明, 邵轶智, 段凯越, 卢彤岩

单位：1.上海海洋大学 水产科学国家级实验教学示范中心，上海 201306；2.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江 哈尔滨 150070；3.上海海洋大学 农业农村部渔业动植物病原库，上海 201306；4.中国水产科学研究院长江水产研究所，湖北 武汉 430223

摘要：为丰富传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreas necrosis virus，IPNV)的检测方法，以Genogroup Ⅰ型的IPNV ChRtm213分离株基因组RNA为模板，利用一步法RT-PCR扩增获得了编码IPNVVP3基因序列(711 bp)，将其克隆至pET-32a原核表达载体，利用大肠杆菌Rosetta进行VP3蛋白表达，以纯化的VP3蛋白为免疫原制备鼠抗血清，利用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)对抗血清效价进行测定，并利用间接免疫荧光抗体法(indirect immunofluorescent antibody test，IFAT)和中国不同地区的IPNV分离株，对抗血清识别中国现行IPNV分离株的能力进行免疫学鉴定。结果表明：SDS-PAGE分析显示，表达纯化的VP3蛋白条带单一，相对分子质量约为45 000，与理论值相符；抗血清效价分析显示，所制备的鼠抗IPNV VP3血清与IPNV的反应效价为16 000，与纯化的IPNV VP3蛋白的反应效价为32 000；间接免疫荧光抗体法分析显示，制备的鼠抗血清能够特异性识别中国不同地区的Genogroup Ⅰ和Genogroup Ⅴ IPNV分离株，且该血清不与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)发生交叉反应，具备较好的特异性。研究表明，本研究中利用原核表达系统表达的IPNV VP3蛋白具有良好的免疫原性，所制备的IPNV VP3抗血清能够特异性识别中国不同地区的IPNV分离株。

关键词：传染性胰脏坏死病毒,蛋白表达,VP3蛋白,免疫原性

基金资助：国家重点研究发展计划“蓝色粮仓科技创新”项目(2019YFD0900105)；中央公益性事业单位基本科研业务费专项(2020GH05，HSY2019M)；国家自然科学基金(31802345)；中国博士后科学基金(2018M630893,2019T12027)