基因组Ⅰ型和Ⅴ型传染性胰脏坏死病毒的分离与鉴定

来源：大连海洋大学学报杂志2021年第5期北京时间：

作者：段凯越, 赵景壮, 任广明, 邵轶智, 卢彤岩, 何保全, 徐黎明

单位：1.上海海洋大学 水产科学国家级实验教学示范中心，上海 201306； 2.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江 哈尔滨 150070； 3.上海海洋大学 农业部渔业动植物病原库，上海 201306； 4.中国水产科学研究院长江水产研究所，湖北 武汉 430223

摘要：为调查造成中国西北某虹鳟Oncorhynchusmykiss养殖场幼鱼出现持续性死亡的病因，采用组织病理切片观察及分子鉴定的方法对患病虹鳟进行了鲑鳟常见病毒筛查，同时采用系统发育分析、电镜观察、滴度测定及人工回归感染等方法对分离获得的毒株进行了基因型分析、显微结构观察及毒力特性分析等研究。结果表明：患病虹鳟的肝、脾及肾组织细胞发生广泛性坏死，并伴随空泡化及溶解等现象；由病鱼内脏组织制备的组织匀浆悬液均能够感染CHSE-214细胞并产生典型细胞病变(CPE)；从该养殖场的不同养殖区域共分离到3株传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus，IPNV)，其中IPNV-F1和IPNV-W2属于基因组Ⅰ型，分别与IPNV中国分离株WZ2016(KX355401)和ChRtm213(KX234591)同源性最高，VP2基因片段序列一致性分别为100%和98.5%，IPNV-W1属于基因组Ⅴ型，与意大利毒株IPNV/O.mykiss/I/PN/208/Mar88(MG543567)同源性最高，二者的VP2基因片段序列一致性为99.1%；接种病毒后的CHSE-214细胞内存在大量呈晶格状排列的无囊膜病毒粒子，3株IPNV分离株在CHSE-214细胞上的平均滴度分别为107.43TCID50/0.1 mL(IPNV-F1)、107.30TCID50/0.1 mL(IPNV-W1)和107.29TCID50/0.1 mL(IPNV-W2)；分别以0.1 mL/尾的剂量向健康虹鳟幼鱼腹腔注射各IPNV分离株，在攻毒后60 d内虹鳟未出现死亡，攻毒后30 d时，病毒在组织中的平均滴度分别为104.50TCID50/0.1 g组织(IPNV-F1)、105.38TCID50/0.1 g组织(IPNV-W1)和104.13TCID50/0.1 g组织(IPNV-W2)，攻毒后60 d时，病毒在组织中的平均滴度下降为103.43TCID50/0.1 g组织(IPNV-F1)、104.50TCID50/0.1 g组织(IPNV-W1)和103.21TCID50/0.1 g组织(IPNV-W2)。研究表明，该发病养殖场同时存在基因组Ⅰ型和Ⅴ型的IPNV，本研究首次从同一养殖场分离到两种基因型的IPNV，可为中国传染性胰脏坏死病(IPN)的防控提供参考。

关键词：虹鳟,传染性胰脏坏死病毒,基因组I型,基因组V型

基金资助：国家重点研究发展计划“蓝色粮仓科技创新”项目(2019YFD0900105)；中央公益性事业单位基本科研业务费专项(2020GH05)；国家自然科学基金(31802345)；中国博士后科学基金(2018M630893，2019T12027)