珍珠龙胆石斑鱼紧密连接蛋白基因Claudin-3与Claudin-12的克隆及精氨酸干预下的肠道表达

来源：大连海洋大学学报杂志2022年第1期北京时间：

作者：李广, 崔晓, 姚春凤, 陈东鸿, 何凯, 陈冠霖, 韩煜轩, 杨奇慧, 迟淑艳

单位：1.广东海洋大学 水产学院，广东 湛江 524088；2.广东粤海饲料集团股份有限公司,广东 湛江 524000；3.南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江)，广东 湛江 524025

摘要：为评价Claudin-3与Claudin-12基因在珍珠龙胆石斑鱼Epinephelusfuscoguttatus♀×E.lanceolatus♂生长和肠道黏膜屏障中的作用，通过同源克隆及RACE PCR技术克隆珍珠龙胆石斑鱼Claudin-3和Claudin-12基因的全长，采用qRT-PCR技术分析Claudin-3和Claudin-12基因在珍珠龙胆石斑鱼脑、鳃、皮肤、肌肉、肝脏、胃、前肠、中肠、后肠、头肾、体肾、脾和心脏13种组织的表达情况，并通过饲料精氨酸干预评估上述两个基因在肠道的表达情况。结果表明：Claudin-3 cDNA全长序列为1 544 bp，包括一个153 bp的5′末端非翻译区(UTR)和743 bp的3′UTR，Claudin-3的开放阅读框(ORF)为648 bp，可编码215个氨基酸的蛋白，预测该蛋白相对分子质量为23 100；Claudin-12 cDNA全长序列为1 236 bp，包括一个118 bp的5′UTR和92 bp的3′UTR，Claudin-12的ORF为1 026 bp，可编码341个氨基酸的蛋白，预测该蛋白相对分子质量为37 400；系统进化树和氨基酸序列比对显示，珍珠龙胆石斑鱼Claudin-3与斜带石斑鱼亲缘关系最近，同源性最高，一致性高达98.14%，珍珠龙胆石斑鱼Claudin-12与的亲缘关系最近，同源性最高，一致性高达91.75%；Claudin-3和Claudin-12基因在被检测的13种组织中均有表达，Claudin-3 mRNA在鳃和体肾中表达量最高(P<0.05)，其次是中肠和肝脏，Claudin-12在脑中表达量最高(P<0.05)，其次是中肠和后肠；饲料中精氨酸含量为3.06%时，珍珠龙胆石斑鱼增重率及肠道Claudin-3和Claudin-12基因表达水平显著高于1.96%和3.74%精氨酸组(P<0.05)。研究表明，Claudin-3和Claudin-12基因表达在适宜精氨酸水平的影响下上调，可维护石斑鱼肠道黏膜屏障完整，并促进鱼体生长。

关键词：珍珠龙胆石斑鱼,紧密连接蛋白,基因克隆,精氨酸

基金资助：广东省自然科学基金(2017A030313155)；南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江)项目(ZJW-2019-06)；广东省大学生创新创业项目(S202010566003)