溶藻弧菌磷酸甲基嘧啶合酶(ThiC)的原核表达及其乙酰化修饰鉴定

来源：大连海洋大学学报杂志2022年第3期北京时间：

作者：王旭东, 范晨龙, 丁燏

单位：广东海洋大学 水产学院，广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，水产经济动物病害控制广东省普通高校重点实验室，广东 湛江 524088

摘要：为研究溶藻弧菌Vibrioalginolyticus磷酸甲基嘧啶合酶(phosphomethylpyrimidine synthase,ThiC)是否存在乙酰化修饰，以溶藻弧菌HY9901基因组为模板，PCR扩增ThiC基因，构建pET-28a-ThiC原核表达载体，在大肠杆菌BL21中诱导表达，并优化其表达条件，然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达及乙酰化情况。结果表明：克隆获得的溶藻弧菌ThiC基因长度为1 941 bp；重组蛋白成功在大肠杆菌BL21中表达,相对分子质量为72 500，其最佳诱导条件为IPTG 0.1 mmol/L、温度37 ℃、诱导时间3 h；经Western blot检测显示，ThiC蛋白具有乙酰化修饰，但在体外不能通过乙酰化酶途径去乙酰化。研究表明，溶藻弧菌ThiC原核表达载体构建成功，该蛋白存在乙酰化修饰，但体外不能去乙酰化，本研究结果为溶藻弧菌的维生素合成过程中酶的翻译后调控机制研究提供了科学参考。

关键词：溶藻弧菌,磷酸甲基嘧啶合酶,原核表达,乙酰化

基金资助：广东省自然科学基金(2014A030313604，2022A1515012203)；广东海洋大学研究生教育创新计划资助项目(201724)