斜带石斑鱼T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)基因表达及重组蛋白制备

来源：大连海洋大学学报杂志2022年第3期北京时间：

作者：李金泽, 汤菊芬, 黄瑜, 简纪常, 施钢, 蔡佳

单位：1.广东海洋大学 水产学院，广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室，广东省水产经济动物病害控制重点实验室，南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江)，广东 湛江 524088；2.广西科学院广西北部湾海洋研究中心，广西海洋天然产物与组合生物合成化学重点实验室，广西 南宁 530007

摘要：为研究斜带石斑鱼EpinepheluscoioidesT细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)在免疫应答过程中的作用，通过聚合酶链式反应(PCR)获得斜带石斑鱼TIM-4的蛋白编码区(GenBank登录号：MZ465580)，利用生物信息学分析其结构特征，采用荧光定量PCR(qPCR)分析TIM-4在健康鱼体中的组织分布，以及经LPS和Poly I:C刺激后的表达变化，并构建原核表达载体质粒TIM-4-4T，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行TIM-4重组蛋白诱导表达。结果表明：斜带石斑鱼TIM-4基因的蛋白编码区片段长度为702 bp，可编码234个氨基酸，含有V-Type(IGV)、BTK和PRY 3个功能结构域；qPCR显示，TIM-4基因在斜带石斑鱼10种组织中均有表达，在胃中的表达量最高(P<0.05)，在脾脏中表达量最低；经LPS刺激后，脾脏细胞中的TIM-4表达量显著降低(P<0.05)，而经Poly I:C刺激后，脾脏细胞中的TIM-4表达量显著升高(P<0.05)；SDS-PAGE电泳显示，TIM-4重组蛋白相对分子质量约为25 100，以包涵体形式表达，在0.4 mmol/L IPTG、37 ℃下诱导6 h时，TIM-4重组蛋白的表达量最大。研究表明，TIM-4基因可能参与了斜带石斑鱼抗感染免疫反应，本研究结果为深入了解TIM-4的生物学功能提供了理论基础。

关键词：斜带石斑鱼,T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4,基因表达,LPS,PolyI:C,重组蛋白

基金资助：国家自然科学基金(U20A2065，32002426，32073006)；广西自然科学基金(2020GXNSFAA297243)；南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江)(湛江湾实验室)自主立项项目(ZJW-2019-06)；广东海洋大学“冲一流”专项资金项目(231419013)；广东海洋大学“冲一流”与“创新强校工程”科研项目(2019KTSCX056)；广西红树林滨海湿地生态保护与可持续利用人才小高地人才资助项目(BGMRC202101)