大菱鲆源杀鱼爱德华氏菌的分离鉴定及其毒力和耐药基因检测分析

来源：大连海洋大学学报杂志2022年第6期北京时间：

作者：黄华, 于广磊, 王力勇, 高雁, 张岚, 孙佰鸣, 庄焱文, 王鹤

单位：1.烟台市海洋经济研究院，山东 烟台 264006；2.山东省海洋资源与环境研究院 山东省海洋生态修复重点实验室，山东 烟台 264006

摘要：为探究2019年山东省烟台市某大菱鲆Scophthalmusmaximus养殖场出现的以腹水、体表及内脏出血为主要症状的疾病发病原因，通过平板划线法从患病濒死大菱鲆(体质量为350 g±5 g)肝、肾、脾和心等组织中分离获得1株优势菌，采用形态学观察，16S rRNA、gyrB基因和rpoB基因序列分析，PCR特异性引物扩增，以及人工回归感染试验等方法对优势菌进行鉴定，检测其毒力基因、耐药基因携带情况，并采用纸片扩增法(K-B)检测分离株对10类23种抗生素的敏感性。结果表明：从患病鱼分离获得的菌株，生理生化特征为革兰氏阴性杆菌，赖氨酸、鸟氨酸和葡萄糖产酸等试验呈阳性，枸橼酸、精氨酸、蔗糖、甘露醇、苦杏仁苷、尿素、硝酸盐还原和氧化酶等试验呈阴性；经16S rRNA、gyrB基因、rpoB基因序列比对，以及爱德华氏菌特异性引物扩增等鉴定，确定其为杀鱼爱德华氏菌Edwardsiellapiscicida；该菌的毒力基因型为fimA+-fimB+-fimC+-fimD+-esrB+-mukF+-katB+-sodB+-citC+-gadB+，耐药基因型为TEM+-ant(3″)-Ⅰ+-tet(A)+-mcr-1+-Sul2+-Sul3--oqxA-；将分离菌株制备成7.8×1010、7.8×109、7.8×108、7.8×107CFU/mL 4个浓度的菌悬液，腹腔注射健康大菱鲆，得到菌株对受试鱼的半致死浓度(LD50)为1.2×108CFU/mL；药敏试验显示，该菌株对磺胺类2种、多肽类2种和利福霉素类1种在内的5种抗生素类药物耐药；对β-内酰胺类5种、氨基糖苷类3种、喹诺酮类5种、大环内酯类1种、氯霉素类1种、四环素类2种和呋喃类1种在内的18种抗生素敏感。研究表明，本试验首次从大菱鲆上检出携带5种耐药基因的杀鱼爱德华氏菌，本研究结果为鱼源耐药性杀鱼爱德华氏菌的分子特性、致病机理和药物防治等研究提供了科学参考。

关键词：大菱鲆,杀鱼爱德华氏菌,分离鉴定,毒力基因,耐药基因

基金资助：烟台市重点研发计划项目(2019MSGY127)；山东省现代农业产业技术体系鱼类创新团队烟台综合试验站(SDAIT-12-10)