斑马鱼Notch信号通路配体基因delta-like 4对smad基因的调控作用
来源：大连海洋大学学报杂志2023年第1期北京时间：
作者：程瑶, 王子睿, 周泽斌, 张鹏, 邱军强, 李伟明, 张庆华
单位：1.上海海洋大学 国家海洋生物科学国际联合研究中心，上海 201306；2.上海海洋大学 水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室，上海 201306；3.密歇根州立大学 渔业与野生生物系，美国 东兰辛 48824
摘要：为研究斑马鱼(Daniorerio)的Notch信号通路配体delta-like4(dll4)对smad基因(smad1和smad7)的调控作用，利用qRT-PCR方法检测受精后2 d(day post fertilization,dpf)的斑马鱼dll4纯合突变体smad家族中smad1和smad7的表达变化，利用生物信息学软件预测smad1和smad7启动子序列的转录结合位点和CpG岛；采用同源重组的方法，构建p3×Flag-CMV-dll4真核表达载体及pGL3-smad1-Luc和pGL3-smad7-Luc报告基因载体，并通过双荧光素酶试验检测dll4对smad1和smad7的调控活性；分别转染两种启动子报告基因载体到HEK293T细胞，共转染启动子报告基因载体与真核表达载体到HEK293T细胞。结果表明：dll4纯合突变体斑马鱼中smad1和smad7表达量均显著下调(P<0.000 1)；两种基因启动子均包含HNF-3、GATA-1和Oct-1等转录因子结合位点，只有smad7启动子存在CpG岛；报告基因pGL3-smad1-Luc和pGL3-smad7-Luc的活性分别为对照组的7.3倍和142.7倍,两种报告基因与p3×Flag-CMV-dll4表达载体共转后，转录活性均升高，分别为对照组的2.8倍和2.2倍，说明p3×Flag-CMV-dll4可以促进pGL3-smad1-Luc和pGL3-smad7-Luc的转录表达活性。研究表明，斑马鱼Notch信号通路配体基因dll4可通过smad基因家族在血管生成中发挥调控作用，为损伤血管的修复和肿瘤血管生成提供特异的生物学靶点。
关键词：斑马鱼,Notch信号通路配体,delta-like 4,smad1,smad7,双荧光素酶报告基因
基金资助：国家重点研发计划“蓝色粮仓科技创新”项目(2019YFD0900102)；教育部留学回国人员科研启动基金(D-8002-15-0042)；水产动物疾病与基因编辑育种的平台建设和前沿科学研究项目(A1-3201-19-3013)
