弗氏柠檬酸杆菌RPA-LFD快速检测方法的建立及应用

来源：大连海洋大学学报杂志2024年第2期北京时间：

作者：王姝然, 范厚勇, 徐嘉楠, 周天琦, 许丹, 郑跃平

单位：1.上海海洋大学 水产与生命学院，上海 201306；2.上海海洋大学 国家水生动物病原库，上海 201306；3.上海海洋大学 农业农村部淡水水产种质资源重点实验室，上海 201306；4.上海市水生野生动植物保护研究中心，上海 200092

摘要：为建立一种针对弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)敏感性高、特异性强的临床快速检测方法，根据该菌定居因子基因cfa的保守序列，设计特异性引物，采用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification，RPA)，并结合琼脂糖凝胶电泳(AGE)和侧流层析试纸条(LFD)方法进行反应条件的优化及特异性与灵敏度的检测。结果表明：本研究中所建立的弗氏柠檬酸杆菌重组酶聚合酶扩增结合侧向流动试纸条(RPA-LFD)快速检测方法，在38 ℃条件下扩增20 min后，能特异性地检测到弗氏柠檬酸杆菌，对弗氏柠檬酸杆菌纯培养物和基因组DNA的最小检出限分别为1.5×102CFU/mL和200 fg/μL，是常规PCR(cfa引物)检测灵敏度(20 pg/μL)的100倍；利用所建立的RPA-LFD法与常规PCR同时检测杂交鲟攻毒试验样本，两种方法的检测结果一致。研究表明，本研究中建立的弗氏柠檬酸杆菌RPA-LFD方法，操作简便、反应迅速、特异性好、灵敏度高，并且不需要昂贵的仪器，该方法可为未来弗氏柠檬酸杆菌细菌性疾病的早期诊断提供更有效的技术支持。

关键词：弗氏柠檬酸杆菌,快速检测,重组酶聚合酶扩增技术,侧向流动试纸条

基金资助：上海市水生野生动植物保护研究中心委托项目“中华鲟主要细菌性疾病的预警和防控”(沪水野研专项2022-01号)