鳗鲡疱疹病毒实时荧光重组酶辅助扩增（RAA）检测方法的建立及应用

来源：大连海洋大学学报杂志2024年第2期北京时间：

作者：陈曦, 杨金先, 葛均青

单位：福建省公益类科研院所基本科研业务专项(2021R1027007，2023R1081)；福建省农业科学院“5511”协同创新工程建设项目(XTCXGC2021013)

摘要：为建立鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus，AngHV)的实时荧光重组酶辅助扩增(recombinase-aided amplification，RAA)检测方法，根据AngHV的ORF95基因序列设计引物和探针，优化反应温度，确定反应时间，并应用该方法对采集的临床样品进行检测。结果表明：本研究中建立的实时荧光RAA检测方法的最佳反应温度为39 ℃，反应时间为20 min；实时荧光RAA检测方法的灵敏度、特异性及重复性评价显示，RAA检测AngHV的最低检测量为1×102copies/μL，可特异性地检测AngHV，与美洲鳗鲡腺瘤病毒(American eel adomavirus，AEAdoV)、蛙虹彩病毒(Rana grylio virus，RGV)、鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus，KHV)和对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus，WSSV)均无交叉反应；实时荧光RAA检测方法的组内和组间变异系数均小于5%，表明实时荧光RAA检测方法灵敏度高、特异性强和重复性好；应用该方法对采集的25份临床样品进行检测显示，实时荧光RAA检测方法与qPCR方法的检出率一致，均为92%，高于普通PCR的检出率(76%)。研究表明，本研究中所建立的鳗鲡疱疹病毒实时荧光重组酶辅助扩增RAA检测方法快速、灵敏、可靠、准确，可用于AngHV的临床快速检测和流行病学调查。

关键词：鳗鲡疱疹病毒(AngHV),实时荧光RAA,快速检测

基金资助：福建省公益类科研院所基本科研业务专项(2021R1027007，2023R1081)；福建省农业科学院“5511”协同创新工程建设项目(XTCXGC2021013)