鰤鱼诺卡氏菌多重PCR 分型方法的建立与应用

来源：大连海洋大学学报杂志2024年第6期北京时间：

作者：李雨豪, 陈宝鑫, 费晴, 林冠英, 黄婷, 夏立群

单位：1.广东海洋大学 水产学院，广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，广东 湛江 524088；2.广东海洋大学深圳研究院 广东省水生动物健康评估工程技术研究中心，深圳海水经济动物种苗健康评价公共技术服务平台，广东 深圳 518120；3.广西壮族自治区水产科学研究院 广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室，广西 南宁 530021

摘要：为建立一种鰤鱼诺卡氏菌(Nocardiaseriolae)多重PCR的分型方法，对已公布的20个鰤鱼诺卡氏菌全基因组数据进行对比分析，筛选鰤鱼诺卡氏菌种内差异基因片段并设计PCR引物，经单重PCR验证确认后进行引物组合、引物配比优化，构建鰤鱼诺卡氏菌的多重PCR菌株分型方法，并对该菌株分型方法进行灵敏度分析和病例应用。结果表明：在试验中构建的多重PCR菌株分型方法可用于鰤鱼诺卡氏菌培养物和感染鱼样分型，并确认鰤鱼诺卡氏菌ArsC、AraC、ISOPREN、ALAT、IclR基因片段具有种内差异；其中多重PCR引物组合Ⅰ(ISOPREN-F/R、ALAT-F/R、IclR-F/R)引物最优配比为ISOPREN-F/R∶ALAT-F/R∶IclR-F/R=2∶1∶2，灵敏度达125 pg/μL，组合Ⅱ(AraC-F/R、ALAT-F/R、IclR-F/R)引物最佳配比为AraC-F/R∶ALAT-F/R∶IclR-F/R=1∶1∶1，灵敏度达500 pg/μL，组合Ⅲ(ArsC-F/R、ALAT-F/R、IclR-F/R)引物最佳配比为ArsC-F/R∶ALAT-F/R∶IclR-F/R=1∶2∶2，灵敏度达500 pg/μL。研究表明，本研究中建立的鰤鱼诺卡氏菌的多重PCR菌株分型方法，可在1～2 h内完成鰤鱼诺卡氏菌的菌株分型鉴定，为水产实践中鰤鱼诺卡氏菌感染病例的菌株分型提供了快速、准确、实用的鉴定方法，可助力鱼类诺卡氏菌病的防控。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌,多重PCR,菌株分型